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        植物組織培養中的污染及預防

        作者: 組培設備 發布時間: 瀏覽次數0

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          組織培養是一種發展迅速的植物繁殖技術,已廣泛應用于單倍體育種、細胞突變體篩選、種苗脫毒復壯、種質資源保存與交流、植物快速繁殖、工廠化育苗等方面,并取得了顯著成效。在組織培養過程中,培養基、潔凈工作臺和接種室的無菌操作不規范、消毒不徹底,會造成組培苗被細菌污染的問題,甚至嚴重影響工作進度和生產效率,導致生產和科研試驗失敗,造成嚴重的經濟損失。因此,降低植物組織培養中的污染率是一個關鍵的技術環節,其中無菌操作技術和經驗積累至關重要。植物組織培養中的污染原因及預防措施概述如下。

        組織培養

          1污染的原因

          1.1細菌污染

          細菌污染的形成是由于接種材料攜帶的細菌或培養基滅菌不完全造成的批量育苗材料的污染。二是員工無菌操作不規范導致的細菌感染。

          1.2真菌污染

          真菌污染主要是由周圍環境中的細菌和不潔凈的空氣造成的,如不潔凈的育苗環境、潔凈的臺式過濾裝置失效、育苗容器開口過大、密封膜密封不嚴等。

          2預防措施

          對于上述導致污染的因素,我們應從以下兩個方面著手預防和減少污染。一方面,應控制外植體的內外細菌載體。內部細菌攜帶者不容易消毒,但可以通過在無菌培養室或溫室中預培養來控制。外源細菌可以通過表面消毒進行滅菌。另一方面,應嚴格規范員工的無菌操作程序,以減少操作環境中的細菌污染,這可以通過規范操作程序來控制。

          2.1選擇合適的外植體

          外植體的正確選擇是組織培養成功的前提。對大多數植物來說,莖尖組織生長速度快,遺傳特性穩定,病毒感染率低,是培育無毒苗的最佳外植體。然而,莖尖的數量相對較少,因此植株中上部的莖段組織也是生產中較好的外植體。由于不同植物不同部位的生長特性不同,宜收集易于消毒滅菌的部位,以降低污染帶菌率。

        組織培養

          2.2外植體的消毒

          外植體可能含有外源和內生細菌,接種前需要消毒。外源細菌可以通過表面消毒進行滅菌。一般的消毒方法是:先用75%的酒精浸泡幾秒至1分鐘,然后迅速用0.1%的氯化汞溶液浸泡5-5 ~ 10分鐘。

          2.3培養基的滅菌

          培養基和培養容器的滅菌大多采用高壓濕熱蒸汽滅菌法,以保證完全的滅菌效果。在殺菌過程中,當壓力升至0.5公斤/平方厘米時,打開排氣閥將鍋內的冷氣排出,然后關閉排氣閥繼續加熱。當壓力升至1.1 kg/cm2和121時,保持15 ~ 20分鐘。

          2.4接種期間嚴格消毒

          工作人員在接種過程中應嚴格規范無菌操作,避免人為因素造成的污染。應定期檢查潔凈工作臺,并定期清潔和更換過濾器,以避免操作區出現細菌。內部過濾器應定期檢測操作區的攜帶量。如果過濾器出現故障,應更換整個過濾器。另外,需要測量操作區的風速,通過壓力調節旋鈕,操作區的風速可以達到無菌操作所需的每分鐘20-30米。操作人員應盡可能少攜帶細菌,嚴格進行實驗,并嚴格消毒接種過程中使用的各種器械。用于接種的儀器應在高溫下滅菌。每次使用后,應浸泡在酒精中,并在酒精燈火焰上燃燒消毒。

          2.5 環境消毒

          不清潔的環境明顯增加了文化的污染率。因此,接種室和培養室應定期清洗消毒。接種前,接種室和培養室應用紫外線消毒30分鐘以上或用蘇2%的水消毒。接種室和培養室應定期熏蒸或噴灑。甲醛和高錳酸鉀熏蒸消毒效果較好,但對人體有一定危害,通常一年熏蒸2-3次。紫外線和臭氧對環境的消毒效果好,使用靈活簡單,對人體危害小。夏季高溫高濕的環境污染率較高,要求培養室的相對濕度控制在70%以下。

        組織培養

          隨著組織培養技術的快速發展,植物組培苗的應用領域越來越廣泛??刂苹驕p少污染是育苗過程中關鍵的一環,它不僅能保證良好的污染控制效果,還能盡力防止外植體受到損傷或輕微損傷而影響生長。因此,控制污染,建立一個清潔的培養環境和無菌植物系統是組織培養和育苗的努力。

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